Kastilyalı Isabella (22 Nisan 1451 - 26 Kasım 1504) Kastilya ve Leon kraliçesiydi. Kastilyalı John II ve ikinci eşi Portekizli Isabel'in kızıydı.
Kastilya kralı olan erkek kardeşi Enrique IV, onu evlendirmek istiyordu. Siyasi bir müttefik edinmek için Portekiz'den biriyle evlenmek istiyordu. 1469'da gizlice Aragonlu Ferdinand II ile evlendi ve ondan beş çocuğu oldu. En küçüğü 1509'da İngiltere Kralı 8. Henry ile evlenen Aragonlu Catherine'di. Isabella, İspanya Kralı I. Carlos'un (Kutsal Roma İmparatoru V. Charles) büyükannesiydi.
Isabella'nın kardeşi öldüğünde, yeni kraliçe olması gerekiyordu. Onun yerine kardeşi Enriques'in kızı Juana kraliçe olmak istedi. Bir savaştan sonra, Isabella kraliçe oldu. Aynı zamanda Isabella'nın kocası Ferdinand da Aragon kralı oldu. Kastilya ve Aragon topraklarını bugünkü İspanya'da birleştirdiler. Isabella, Kristof Kolomb'un Amerika kıtasını bulmak için yaptığı dört seyahatin masraflarının karşılanmasına yardımcı oldu. Onların zamanında Amerika kıtası "Yeni Dünya" olarak adlandırılıyordu. 1492'de İspanya'yı Hıristiyan bir ülke haline getiren bir ateşkes imzaladı. O öldükten sonra kızı Kastilyalı Joanna kraliçe oldu.
