Eyaletlerarası 81, Amerika Birleşik Devletleri'nin doğusunda kuzey-güney yönünde uzanan bir eyaletlerarası yoldur. Güneyde Dandridge, Tennessee'den kuzeyde Wellesley Island, New York'a kadar uzanır; toplamda yaklaşık 854,89 mil (1.375,81 km) mesafe kat eder. Neredeyse tüm uzunluğu boyunca Appalachian Dağlarını takip eder.

Eyaletlerarası 81 Tennessee'de Dandridge'deki Eyaletlerarası 40'tan başlar. Güzergah, Tennessee ve Virginia boyunca Appalachian Dağları'nı takip ederek Bristol, Tennessee ve Bristol, Virginia, Roanoke, Blacksburg, Lexington, Staunton, Harrisonburg ve Winchester gibi ikiz şehirlere hizmet vermektedir. Harrisonburg'da I-81 James Madison Üniversitesi kampüsünü kesmektedir. Virginia'daki tüm uzunluğu boyunca eski muadili olan U.S. Route 11'i takip eder.

Interstate 81 kısa bir süreliğine Batı Virginia'nın doğu yakasına girerek Martinsburg şehrine hizmet vermektedir. Daha sonra Maryland eyaletini en dar noktalarından birinden geçerek "Hub City" Hagerstown'dan geçer ve burada birçok başka güzergahla kesişir.

Interstate 81, Pennsylvania eyaleti boyunca kuzey-güney yönünde önemli bir koridor oluşturmakta ve Pennsylvania Paralı Otoyolu ile buluştuğu Chambersburg ve Carlisle ilçelerine hizmet vermektedir. Ancak I-81 ile doğrudan kesişmez (sürücüler bağlantı için US 11'i kullanmalıdır). Eyalet başkenti Harrisburg civarında, güzergah Pennsylvania'nın Başkent Çevre Yolu'nun kuzeydoğu bölümünü oluşturur. Güzergah daha sonra Wilkes-Barre ve Scranton şehirlerine hizmet verdiği Wyoming Vadisi'ne doğru kuzeydoğuya ilerler, ardından Sonsuz Dağlar bölgesinden kuzeye eyalet sınırına doğru ilerler. Kuzey-güney otoyolu olarak işaretlenmiş olmasına rağmen, eyalet boyunca belirgin bir şekilde kuzeydoğu-güneybatı ve bazen de doğu-batı yönündedir.

Interstate 81, Binghamton yakınlarında New York eyaletine girer. Eyaletin büyük bir kısmı boyunca kuzey-güney yönünde ABD Route 11'i takip eder. Syracuse (New York State Thruway ile kesiştiği yer) ve Watertown şehirlerine hizmet vermektedir. Rota, Kanada sınırında, St Lawrence Nehri'ni geçtiği Thousand Islands Köprüsü'nde sona erer ve Thousand Islands Parkway ve Highway 401'e hizmet veren kısa bir bağlantı olan Highway 137 olarak devam eder.

Altı eyaletten oluşan bir koalisyon olan Eyaletlerarası 81 Koridoru Koalisyonu, Eyaletlerarası 81 boyunca kamyon trafiği ve hava kirliliği gibi sorunları ele almak üzere örgütlenmiştir. Bu komisyon 15 Ekim 2008 tarihi itibariyle iki kez toplanmıştır.